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2017年华东干细胞库技术培训

来源:网络    作者:佚名    时间:2017-06-30    点击: 次   

 华东细胞库将在2017年7月17日到8月1日进行间充质干细胞(MSC)胚胎干细胞(ES)诱导性多能干细胞(iPS)crispr-cas9四期的技术培训,其培训类容为:(1)间充质干细胞(MSC)技术培训   间充质干细胞成脂分化,制备神经悬球、成软骨悬球;成脂、成骨分化鉴定,软骨细胞分化,包括细胞球制备,软骨细胞固定,包埋、切片、软骨细胞的染色观察等。(2)胚胎干细胞(ES)技术培训   hESCs最新研究进展、滋养层细胞的制备、hESCs的复苏、冻存、多种传代方法、无滋养层培养以及hESCs的定向分化诱导等。(3)诱导性多能干细胞(iPS)技术培训 质粒转染、病毒包装、病毒滴度测定、重编程细胞的鉴定(体外实验及体内实验)及小鼠胚胎成纤维细胞原代取材等。(4)crispr-cas9技术培训   Crispr/Cas9 gRNA 载体构建(载体酶切,连接,转化);载体构建-挑克隆,小摇PCR鉴定;基因编辑细胞的转染;基因编辑细胞的鉴定;基因编辑细胞的筛选。

培训时间:(1)间充质干细胞技术培训,2017年7月17日-20日

(2)胚胎干细胞技术培训,2017年7月21日-24日

         (3)iPS细胞培养技术,2017年7月25日-28日

         (4)crispr-cas9技术培训,2017年7月29日-8月1日

培训地点:上海市赤峰路50号,同济大学医学院六楼华东干细胞库
培训对象:主要以从事干细胞生物学、表观遗传学、医学等相关领域的科研人员、博士后、研究生、医务人员为主要对象。为保证每位学员都能得到实际操作训练,每期培训班人数不超过12人。

培训安排:
间充质干细胞技术培训日程(2017年7月17日-20日)

Day 1   1. 培训班开班仪式,相关情况介绍;

2. 专家讲座:间充质干细胞研究进展报告;

3. 脂肪间充质干细胞成脂分化(4天后可观察到结果)。

Day 2   1. 当天实验内容介绍与背景知识 ;

2. 大鼠BMSCs和ADSCs的分离;

3. 制备神经悬球,成软骨悬球。

Day 3  1. 当天实验内容介绍与背景知识;

2. 给昨天制备的细胞换液;

3. 三系分化的操作:成脂、成骨分化鉴定,包括BMSCs和ADSCs,包括试剂配置,染色步骤,显色,比较成脂及成骨能力的差异;

4. 软骨细胞分化,包括细胞球制备,软骨细胞固定,包埋,切片、软骨细胞染色观察。

Day 4  1. 当天实验内容介绍与背景知识;

2. 神经分化细胞RNA提取,成骨分化基因的鉴定;

3. Q-PCR鉴定特征分子的表达;

4. 细胞固定并结合荧光标记的抗体(6皿细胞:2皿BMSC,4皿ADSC);

5. 流式技术确定骨髓及脂肪间充质干细胞表面特征分子的表达;

6. 实验问题总结与交流;

7. 颁发结业证书。

 
胚胎干细胞技术培训日程(2017年7月21日-24日)
Day 1   1.ES细胞研究进展介绍;

2.干细胞库及临床干细胞研究介绍;

3.人ES细胞实验流程介绍;

4.小鼠胚胎成纤维细胞原代取材。

5.复苏滋养层细胞

Day 2   1.人ES细胞的复苏;

2.人ES细胞的机械传代。

Day 3   1.滋养层细胞MEF制备;

2.人ES细胞的胶原酶传代

3.人ES细胞体外诱导分化;

4.复苏细胞换液观察。

Day 4   1.机械传代换液观察;

2.人ES细胞的冻存;

3.人ES细胞的无滋养层培养。

4. 人ES体外分化细胞观察;

5. 人ES细胞的鉴定:标志基因的免疫荧光染色及碱性磷酸酶染色。

6. 颁发结业证书

 
 
 IPS细胞培养技术培训日程(2017年7月25日-28日)

Day 1   1. iPS细胞研究进展介绍;

2. 干细胞库及临床干细胞研究介绍;

3. iPS细胞制备流程介绍;

4. 病毒包装相关质粒的转染;

5. 小鼠iPS细胞的传代与类胚体的培养。

Day 2   1. MEF与HEF的传代与铺板;

2. 小鼠胚胎成纤维原代细胞的制备

Day 3   1. 小鼠iPS细胞克隆形态观察;

2. 标志性基因的免疫荧光染色实验与AKP染色实验;

3. 病毒感染。

Day 4   1. 病毒感染细胞培养液的更换;

2. AKP染色、免疫荧光染色结果观察。

3. 类胚体形态观察;病毒滴度测定;

4. 畸胎瘤形成实验:iPS细胞注射;

5. 观察重编程起始阶段的细胞形态变化;

6. 颁发结业证书。

 

crispr-cas9技术培训日程(2017年7月29日-8月1日)

Day 1   1. 培训班开班仪式,相关情况介绍;

2. 专家讲座:基因编辑研究进展报告;

3. Crispr/Cas9 基因编辑技术策略;

4. 碱基退火

Day 2   1.当天实验内容介绍与背景知识 ;

2.Crispr/Cas9 gRNA 载体构建(载体酶切,连接,转化);

Day 3   1.当天实验内容介绍与背景知识;

2.载体构建-挑克隆,小摇PCR鉴定;

3.基因编辑细胞的转染;

4.基因编辑细胞的鉴定;

Day 4   1. 当天实验内容介绍与背景知识;

2. 基因编辑细胞的筛选;

3. 实验问题总结与交流;

4. 颁发结业证书。

 

联系方式:http://meeting.bioon.com//tsh_stemcell02?__token=bpc-zuixinhuiyi

报名咨询:汤海荣
Name :汤海荣
E-mail: hairong.tang@bioon.com
M t :13524820860
 
报名咨询:刘明丽
Name :刘明丽
E-mail: mingli.liu@bioon.com
M t :18210934968
 

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